Innovative Laser-Mikrodissektionstechnologie von Olympus
In der modernen biomedizinischen Forschung müssen Zellen in kürzester Zeit isoliert und auf molekularer Ebene analysiert werden können; eine Anforderung, die vor allem bei Genom- und Proteomanalysen sowie bei vielen pharmazeutischen Fragestellungen eine essentielle Rolle spielt. Darüber hinaus muss in diesen Anwendungen, ebenso wie in der Pathologie und der Forensik, die Kontaminationsfreiheit der Proben während des gesamten Prozesses gewährleistet werden können. Zudem muss die Auswahl und Isolierung der gewünschten Geweberegionen, der einzelnen Zellen, der subzellulären Strukturen oder einzelnen Chromosomen mit höchster Präzision durchführbar sein.
Die Laser-Mikrodissektion ist eine innovative Technologie, die all diesen Anforderungen gerecht wird. Schnitte von tiefgefrorenen oder in Paraffin eingebetteten Gewebeproben, von Abstrichen oder Zellkulturen sowie deren anschließende Mikromanipulation lassen sich schnell, zuverlässig und präzise durchführen. Bei diesem Verfahren wird ein direkter Kontakt mit den Proben vermieden, so dass die Kontaminationsgefahr minimiert wird. Selbst lebende Zelle aus Zellkulturen wie beispielsweise Stammzellen können isoliert und rekultiviert werden ohne dabei verletzt oder im Wachstum beeinträchtigt zu werden.
Die Olympus Laser-Mikrodissektionssysteme CellCut und SmartCut bieten dem Anwender noch weit mehr Vorteile. In Verbindung mit einem inversen Olympus-Mikroskop und ausgestattet mit einem UVa-Festkörperlaser, können mit dem CellCut- und SmartCut-System Zellgruppen, einzelne Zellen oder selbst Zellkomponenten schnell und exakt aus den verschiedensten Probenmaterialien isoliert werden. Die zugrunde liegende, patentierte CapLift®-Technologie ermöglicht dabei eine vollständig kontaktfreie Gewinnung der gewünschten Probenregionen.
Wie funktionieren CellCut und SmartCut?
CellCut ist ein ausgesprochen vielseitiges Forschungssystem. Es beinhaltet ein inverses Olympus-Mikroskop der IX2-Serie und bietet somit auch eine überragende Bildqualität die zu isolierenden Zellen lassen sich schnell und zielgenau lokalisieren. SmartCut ist als Komplettsystem mit integriertem Olympus CKX41-Mikroskop für anspruchsvolle Routineanwendungen und Ausbildungszwecke entwickelt worden. Beide Systeme enthalten dieselbe anwenderfreundliche Software und Benutzeroberfläche. Die gewünschten Probenregionen werden durch einfache Freihandzeichnung oder mittels vordefinierter geometrischer Formen ausgewählt. Dabei können so viele Zellgruppen, Zellen und Zellkomponenten wie erforderlich umrandet werden.
Der diodengepumpte UVa-Festkörperlaser (355 nm) bietet eine außergewöhnliche Schnittgenauigkeit mittels Olympus UIS2-Objektiv wird der Laser auf einen Strahlenpunkt von weniger als 1 µm Größe fokussiert. Bei diesem hoch präzisen, ablativen Prozess wird keine Hitze erzeugt, so dass die angrenzenden Probenbereiche weder erwärmt noch beschädigt werden. Ein scharfer, klarer Schnitt trennt die gewünschte Probenregion vom angrenzenden Gewebe.
Für die Mikrodissektion mit dem CellCut- und SmartCut-System werden spezielle membranbespannte Trägerrahmen benötigt. Das Probenmaterial wird direkt auf die Membran platziert. Anschließend wird der Trägerrahmen umgedreht und auf einen Standard-Glasobjektträger gelegt. Dieser einzigartige Aufbau schützt die Probe effektiv vor Verunreinigung aus der Umgebungsluft, was z.B. für nachfolgende DNA- oder RNA-Analysen bedeutsam ist.
Die per Mikrodissektion ausgeschnittenen Probenbereiche werden mit der einzigartigen, patentierten CapLift-Technologie sauber und rückstandslos isoliert. Bei diesem Vorgang wird zunächst die adhäsive Deckelinnenseite des CapLift-Microtubes im Bereich der zu isolierenden Probenregion auf die Membran gedrückt und nach der Dissektion anschließend wieder angehoben. Dabei bleiben einzig die ausgeschnittenen Probenbereiche auf dem Deckel haften. Der Deckel des CapLift-Microtubes kommt hierbei nur mit der Membran des Probenträgers in Berührung, so dass die Probe berührungs- und kontaminationsfrei bleibt. Das CellCut-System erlaubt zusätzlich eine Automatisierung des Mikrodissektionsprozesses in folgende Teilschritte: Positionieren des Deckels über der Schnittzone, Platzieren des Deckels auf der Membran und Abrücken des Deckels sobald die entsprechenden Probenbereiche ausgeschnitten worden sind. Der komplette Prozess wird anwenderfreundlich über die UV-Cut-Software gesteuert. Beim SmartCut-System werden diese Schritte hingegen alle manuell durchgeführt.
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