esiWay Silencing Resource

Am RZPD haben wir Ausgangsprodukte für das spezifische Ausschalten von Genen in Säuger-Zelllinien, die esiWay Silencing Ressourcen, hergestellt. Aus diesen Ressourcen werden durch T7-vermittelte in vitro Transkription von gen-spezifischen PCR Produkten lange dsRNAs hergestellt, die in einem nachfolgenden Verdau durch ein rekombinantes Dicer Enzym zu Pools von 21-23 bp großen siRNA Molekülen zerkleinert werden. Dieser Pool an siRNAs wird esiRNA genannt. Die Transfektion der esiRNA in geeignete Zelllinien führt zu einem spezifischen Ausschalten des gewünschten Zielgens durch den Mechanimus der RNA Interferenz.
Unsere Erfahrungen zeigen, dass die höchste Effektivität der esiWay Silencing Ressourcen für das Ausschalten eines spezifischen Gens in Kombination mit dem X-tremeGENE siRNA Dicer Kit und dem X-tremeGENE Transfektions Reagenz der Firma Roche Applied Science hervorgerufen werden und die Zellen während des gesamten Experimentes nur geringe cytotoxische Effekte zeigen. Off-target Effekte der esiRNA werden dabei nicht beobachtet.
Das RZPD bietet Gen-spezifische esiWay Silencing Ressourcen für das menschliche Genom und das Mausgenom an. Die Verfügbarkeit dieser Ressourcen für ausgewählte Gene können in einem multidimensionalen Suchtool, dem GenomeCubeTM, anhand von GenIDs oder Sequenzdaten überprüft werden.