Fluorescence Lifetime Imaging – kombiniert mit Weitfeld-, TIRF- und SDC-Mikroskopie (FLIM-System für Lebend-Zell-Aufnahmen)

Das FLIM-System für Lebend-Zell-Aufnahmen

Intelligent Imaging Innovations (3i) bietet ein FLIM-Setup, dass vollständig in ein aktuelles Fluoreszenzmikroskop integriert werden kann. Das ermöglicht unkompliziert die Kombination von Fluorescence Lifetime Messung mit z.B. Weitfeld-Fluoreszenz-Imaging, Spinning Disk Confocal Imaging, TIRF und Dekonvolution. Das System nutzt die Frequency-Domain Methode mit einem hochfrequent moduliertem Laser und einem synchronisierten Verstärker. Dadurch können mehrere Lifetime-Bilder pro Sekunde gemessen werden, was einen wesentlichen Geschwindigkeitsvorteil im Vergleich zu klassischen Photon-Counting FLIM Systemen darstellt. FLIM in lebenden Zellen wird hiermit praktikabel. Die Aufnahme und anschließende Analyse der FLIM-Daten ist vollständig in 3is Slidebook Software, die das ganze System steuert, integriert. Durch die graphische Darstellung mittels Polar Plot (Phasor) lassen sich multiple Fluoreszenz-Spezies, FRET-Effizienz und Mischungsverhältnisse intuitiv visualisieren. Weiterführende Berechnungen liefern FRET-Messungen 1. und 2. Grades, Funktionsmapping und Lifetime - Zeit-Graphen, die auch online während der Aufnahme dargestellt werden können. Zusätzliche Analysemöglichkeiten sind über die Slidebook-Matlab Schnittstelle gegeben.