06.07.2006 • Mikroskopie / Bildgebung • Produktfokus Analytica

Modernste Laser-Mikrodissektion Technologie

Forschungsexperimente auf molekularer Ebene erfordern in der Regel die Isolierung und Weiterverarbeitung vieler Zellen innerhalb kürzester Zeit. Dies gilt ganz besonders für die Genom-, Proteom- und Pharmaforschung. Für diese wie auch viele andere Bereiche, in denen molekularbiologische Analysen durchgeführt werden, z.B. in der Pathologie und Forensik, muss zudem eine 100%ige Kontaminationsfreiheit der Proben während der Probenvorbereitung absolut sicher gestellt werden. Darüber hinaus ist für die Auswahl und Auslese von Gewebebereichen, Einzelzellen, Zellbestandteilen oder sogar bestimmten Chromosomen, höchs­te Prozesspräzision unentbehrlich. All diese Voraussetzungen erfüllt die Laser-Mikrodissektion. Mithilfe dieser innovativen Technologie können Dissektion und Bearbeitung von Paraffin- und Gefriergewebeschnitten und sogar von Ausstrichen und Zellkulturen schnell, zuverlässig und präzise durchgeführt werden.

Bei dieser Methode entfällt die Notwendigkeit des direkten Kontakts mit der Probe, wodurch die Gefahr einer Kontamination eliminiert wird. Zudem können lebende Zellen aus spezialisierten Kulturen (z.B. Stammzellen) ohne jegliche Verletzung oder Beschädigung isoliert und rekultiviert werden.Ein solches kontaktfreies Mikromanipulationssystem für eine breite Vielfalt molekularbiologischer Life Science-Analysen bietet Olympus in Kooperation mit Molecular Machines & Industries (MMI). Das mit Olympus Invers-Mikroskopen kombinierte CellCut Laser-Mikrodissektionssystem mit Festkörperlaser und speziellen, patentierten Separationstechnologien ermöglicht die schnelle und präzise Separation einzelner Zellen oder Zellgruppen aus einer Vielzahl von Probenarten.

Wie funktioniert CellCut?

Das mit den Olympus IX51 und IX71 Invers-Mikroskopen kombinierte CellCut System weist eine hohe Bildqualität zur schnellen und einfachen Identifizierung der zu isolierenden Zellen auf. Nach der Vorselektion der gewünschten Anzahl von Einzelzellen oder Zellgruppen werden diese automatisch mit einem hochpräzisen UV-Laser ausgeschnitten.Der diodengepumpte UV-Festkörperlaser garantiert bei 355 nm absolute Stabilität und außergewöhnliche Schnittpräzision durch die Fokussierung durch das Olympus UIS2-Objektiv auf eine Lichtpunktgröße unter 1µm. Da der Laserschnitt selbst ein ablativer Prozess ist, werden die anliegenden Bereiche weder erhitzt noch beschädigt. Es entsteht eine saubere Abgrenzung zwischen gewünschter Probe und umgebendem Gewebe.Die Proben sind auf einem membranüberzogenen Rahmen mit einem Glasträger als Unterlage aufgebracht, so dass die Probe effizient gegen Verunreinigungen aus der Umgebung geschützt wird. Von besonderer Bedeutung ist dies für alle Anwendungen mit DNA- oder RNA-Extraktion.Die Mikrodissektionsproben werden mittels einer speziellen patentierten Vorrichtung, der IsolationCap, vom Präparat getrennt. Diese IsolationCap sitzt auf der Membrane ohne direkten Kontakt zur Probe, wodurch auch in diesem Schritt jegliche Kontaminationsgefahr ausgeschlossen ist. Am Deckel bleiben nur die ausgeschnittenen Probenteile haften. Die automatische Cap Lift-Funktion ermöglicht es, alle Schritte der Probennahme softwaregesteuert auszuführen.

Die Software

Einer der Vorteile von CellCut ist seine hochinnovative und dennoch benutzerfreundliche Software. Das intuitive Grafikinterface ermöglicht die direkte Steuerung von speziellen Laser-Mikrodissektionsfunktionen und bildanalytischen Scanprozessen.Der motorisierte Hochpräzisions-XY-Tisch wird entweder über die Maus oder das Keyboard bedient. Eine Totalansicht des kompletten Glasträgers ermöglicht die einfache und schnelle Navigation über die gesamte Probe. Zur Festlegung der Schnittlinie ist entweder ein Freihandzeichenwerkzeug verfügbar oder vordefinierte geometrische Figuren, z.B. Kreise, Vierecke oder Ellipsen. Vor dem automatisierten Ausschneiden können beliebig viele Bereiche über den gesamten Glasträger markiert werden. Die Markierung geschieht per Maus oder Touchscreen.

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